A polipeptidlánc szintézise az iniciáló aminosav és a lánc második aminosava közötti peptidkötés kialakulásával folytatódik. A peptidkötés kialakulásának feltétele, hogy a két amino-acil-tRNS egyszerre kötődjön a riboszóma felületén. A riboszóma kisebbik alegységén két kötőhely van. Az egyik köti az iniciáló aminosavat, majd később a készülő polipeptidláncot, ezért ezt peptidil-(P)-helynek nevezzük. A másik kötőhelyen az éppen beépülő amino-acil-tRNS kötődik (akceptor, A-hely). A második aminosavat hordozó tRNS kötődéséhez elongációs fehérje és GTP szükséges. A riboszóma felületén kötött két aminosav között peptidkötés létesül, a metionin tRNS-e felszabadul. Újabb GTP és transzlokáz jelenlétében az AS2-tRNS-hez kapcsolt dipeptid a riboszóma P-helyére kerül át, s a felszabaduló A-helyen újabb aminosavat hordozó tRNS kötődik meg. Újabb peptidkötés kialakulásával a lánc egy aminosavval lesz hosszabb, s a P-helyen kötött tripeptid felületéről az AS2-tRNS felszabadul, a tripeptid a harmadik aminosavat hordozó tRNS-sel együtt (AS3-tRNS) átkerül a P-helyre, az A-helyen a polipeptidlánc negyedik aminosavát hordozó tRNS kötődik. A lánchosszabbodás minden egyes lépése a GTP energiáját igényli.