Jeromos legnagyobb vállalkozása a latin nyelvű Biblia szövegének felülvizsgálata volt. Még Rómában Damasus pápától kapta erre vonatkozó megbízatását, amikor az egyházfő titkára volt. A pápa először a latin nyelvű evangéliumok szövegének javítására kérte fel Jeromost, majd a Biblia revíziója is feladatává vált. Jeromos mintegy két évtizeden keresztül foglalkozott a Bibliával, aminek következtében megszületett a Vulgatának nevezett latin szöveg. Élete második felében is visszatért a Szentírás gondozásához, amikor az egész Bibliát akarta lefordítani. Vállalkozásának értelmét ugyan sokan kétségbe vonták – a kortárs Ágoston is –, Jeromos mégis mindvégig meg volt győződve arról, hogy az igényes és pontos fordítás elmélyültebb hitismerethez vezethet. Ezt elősegítendő az ószövetségi könyveket nem a görög nyelvű Septaguinta alapján vizsgálta felül, hanem Órigenész Hexapláját alapul véve megkísérelt visszanyúlni a héber szövegekhez. Ezt megkönnyítette, hogy Jeromos egy tudós rabbitól a héber nyelvet is elsajátította. Bár a Vulgatát kezdetben tartózkodás fogadta, az elkövetkező századoktól Jeromos szövege vált a Biblia legelterjedtebb változatává a latin Nyugaton, kiszorítva a Szentírás korábbi verzióját. Jeromos tevékenysége révén megszületett az ókeresztény patrisztika nagy eredménye, a középkori iskolák legtöbbet olvasott és értelmezett szövege, a Vulgata.