Benedek Csilla, Hajas Lívia, Hermánné Dr. Juhász Réka

Élelmiszerkémiai laboratóriumi gyakorlatok

Dietetikus hallgatók számára

7. feladat: Fehérbor aminosavösszetételének minőségi meghatározása

A kapott mintát az előírt töménységig párolja be (ld. 1–2. lépés) és vigye fel a megfelelően előkészített állófázisra (ld. 4–5. lépés). A mozgófázist és az előhívószert tartalmazó, oldószergőzzel telített futtató edénybe (ld. 3. lépés) helyezze be az állófázist (ld. 6. lépés). Az elválasztott aminosavakat melegítéssel tegye láthatóvá (ld. 7. lépés), majd számolja ki az egyes komponensek távolságát az oldószerfronthoz képest (ld. 8. lépés) és vesse össze az azonos körülmények között futtatott standardok retenciós faktorjával.

Állófázis	kör alakú szűrőpapír (melyen koncentrikus körökként jelennek meg az elválasztott aminosavak)
Mozgófázis (vagy futtatószer)	n-butanol : ecetsav : víz = 4 : 1 : 1 arányú elegye
Előhívószer	0,5 %-os ninhidrin oldat (mely hő hatására az aminosavakkal színreakciót ad)

Egy üveg bepárlótálba mérőhenger segítségével mérjen ki 20 cm3 bormintát.
Elektromos melegítőn párolja be, amíg a minta térfogata kb. egyharmadára csökken.

Honnan fogja tudni, hogy elérte a kívánt térfogatot? Mielőtt hozzálátna a minta kiméréséhez, töltsön 7 cm3 desztillált vizet a bepárlótálba és az edény külső falán filctollal jelölje meg a folyadékszintet. Ne felejtse el kiüríteni a tálat a minta kimérése előtt!
A vegyi fülke alatt mérőhengerrel mérjen ki 7 cm3 futtatószert és öntse egy Petri-csésze alsó részébe. Osztott pipetta segítségével adjon hozzá 0,7 cm3 ninhidrin előhívó oldatot. A csészét a tetejével fedje le és tegye be a fiókjába.

A 6. lépésig ne nyissa ki a csészét. Tartsa zárva, hogy az elpárolgó oldószerekből megfelelő (telített) gőztér alakulhasson ki.
Vegyen egy szűrőpapír korongot. Óvatosan hajtsa félbe, majd újra félbe. Nyissa ki és ceruzával óvatosan jelölje meg a korong középpontját. Ez lesz a futtatás startpontja, ahová később a mintát felviszi. Tőle jobbra mérjen ki 0,5 cm-t és húzzon egy függőleges vonalat a szűrőpapír széléig. Ezután a középponttól balra is mérjen ki 0,5 cm-t és húzzon egy függőleges vonalat.

Ne nyomja meg erősen a ceruzát, nehogy megsértse a szűrőpapírt!

Harvard

(): . : . : /hivatkozas/m1399ellag_326/#m1399ellag_326 ()

Chicago

. . . : . (: /hivatkozas/m1399ellag_326/#m1399ellag_326)

APA

(). . . (: /hivatkozas/m1399ellag_326/#m1399ellag_326)

BibTeX EndNote Mendeley Zotero

A középvonalig vágja be a szűrőpapírt a rajzolt egyenesek menetén. Az így kapott kb. 1 cm-es csíkon a korong középpontjától lefelé mérjen ki 2,5 cm-t és húzzon egy vízszintes vonalat. Végül vágja le a papírcsík vonal alatti, „felesleges” (satírozott) részét. Ezt a rövidre vágott papírcsíkot fogja később a futtatószer és az előhívószer elegyébe belelógatni.

Harvard

(): . : . : /hivatkozas/m1399ellag_328/#m1399ellag_328 ()

Chicago

. . . : . (: /hivatkozas/m1399ellag_328/#m1399ellag_328)

APA

(). . . (: /hivatkozas/m1399ellag_328/#m1399ellag_328)

BibTeX EndNote Mendeley Zotero

Vegyen egy üveg kapilláris csövet. Mártsa a bepárolt bormintába, majd érintse a szűrőpapír-korong középpontjához. Ismételje meg ötször a felvitelt és minden felvitel után szárítsa meg a papírt.

Ügyeljen arra, hogy a folt minél kisebb és koncentráltabb legyen!
A rövidre vágott papírcsíkot hajtsa be. A fiókból vegye elő a Petri-csészét, helyezze az asztalra és vegye le a tetejét. A szűrőpapírkorongot óvatosan fektesse rá a Petri-csészére úgy, hogy csak a behajtott papírcsík érjen a futtatószerbe. Zárja vissza a Petri-csészét úgy, hogy a fedelét fejjel lefelé ráhelyezi a szűrőpapírkorongra.

Harvard

(): . : . : /hivatkozas/m1399ellag_330/#m1399ellag_330 ()

Chicago

. . . : . (: /hivatkozas/m1399ellag_330/#m1399ellag_330)

APA

(). . . (: /hivatkozas/m1399ellag_330/#m1399ellag_330)

BibTeX EndNote Mendeley Zotero

Kapilláris erők hatására a mozgó fázis a papírcsíkon elkezd felfelé áramlani és magával viszi a középpontba felvitt mintát. Ügyeljen rá, hogy a Petri-csésze minél rövidebb ideig legyen nyitva és gondosan zárja vissza. Ha a futtatóedény gőztere nem telített, az oldószer elpárolog a papírról, amely egyenetlen áramlást és foltokat fog eredményezni.

A futtatás addig tart, míg az oldószer a korong szélét kb. 1 cm-re megközelíti. Ekkor a szűrőpapírt távolítsa el a Petri-csészéről úgy, hogy nedves részeihez ne nyúljon, csak a szélein fogja meg. Ceruzával azonnal rajzolja meg az oldószerfront szélét.

Harvard

(): . : . : /hivatkozas/m1399ellag_333/#m1399ellag_333 ()

Chicago

. . . : . (: /hivatkozas/m1399ellag_333/#m1399ellag_333)

APA

(). . . (: /hivatkozas/m1399ellag_333/#m1399ellag_333)

BibTeX EndNote Mendeley Zotero

Levegőn szárítsa meg a szűrőpapírt, majd 10 percre helyezze 110°C-os szárítószekrénybe. A hő hatására megjelent színes sávok határát és közepét jelölje meg ceruzával.

Harvard

(): . : . : /hivatkozas/m1399ellag_335/#m1399ellag_335 ()

Chicago

. . . : . (: /hivatkozas/m1399ellag_335/#m1399ellag_335)

APA

(). . . (: /hivatkozas/m1399ellag_335/#m1399ellag_335)

BibTeX EndNote Mendeley Zotero

Vonalzóval mérje le az oldószerfront végső határvonalának és az aminosav sávok középpontjának startponttól (a szűrőpapírkorong középpontjától) való távolságát. Minden sávra számolja ki a retenciós faktor (Rf) értéket.

Az azonos körülmények között futtatott aminosav standardok Rf értéke segítségével azonosítsa a mintában jelenlévő aminosavakat:

Aszparaginsav	0,25	Alanin	0,62
Szerin	0,33	Triptofán	0,81
Glutaminsav	0,39	Valin	0,82
Glicin	0,49	Leucin	0,86
Tirozin	0,53	Prolin	0,87

Ha a Rf alapján az azonosítás nem egyértelmű (nincs Rf azonosság), válassza a számolt Rf értékhez legközelebb eső aminosavat!

	Távolság a startponttól (mm)	Retenciós faktor	Aminosav megnevezése
Oldószer front		—	—
A1
A2
A3
A4
A5

Beadandó:

A lemért távolságok, a számolt Rf értékek és a bormintában levő aminosavak megnevezése. A kromatogramot csatolja a jegyzőkönyvhöz.

Felkészülést segítő kérdések

Milyen célt szolgál a kromatográfia?
Mit jelent az eluens?
Mit nevezünk kromatogramnak?*
Mi hordozza a kromatogramon a minőségi információt? Hogyan azonosítjuk a kromatográfiás eljárások során elválasztott anyagokat?*
Mi hordozza a kromatogramon a mennyiségi információt?*
Milyen szempontok szerint csoportosíthatók a kromatográfiás eljárások?*
Papírkromatográfiás mérés esetén mi az elválasztás mechanizmusa?
Mit nevezünk adszorpciónak?
Mi az állófázis az aminosavak kromatográfiás mérése során?
Mi a mozgófázis az aminosavak kromatográfiás mérése során?
Mit nevezünk előhívásnak a papírkromatográfiában?*
Mi a ninhidrin szerepe az aminosavak kromatográfiás mérése során?
Milyen színt ad az aminosavak és a ninhidrin reakciója során keletkező termék? Minden aminosav esetében egyforma?*
Mi a retenciós faktor?

A *-gal megjelölt kérdésekre a válasz a kurzus Moodle felületére feltöltött elméleti összefoglalóban található. A felkészülés során ezt az anyagot is nézze át!